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每次懂一点流式细胞仪

时间:2020/10/8 13:43:20 来源:一本正经

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流式细胞仪的应用越来越广泛，小编在pubmed中输入关键词“流式细胞仪”搜索的文献篇数整理如下图。

小编废话不多说，干货送上来~

流式细胞仪（Flowcytometry，FCM）是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。

工作原理

它主要有四部分组成：

流动室和液流系统;

光源与光学系统、信号收集信号转换系；

计算机与分析系统；

具有分选功能的流式细胞仪还包括分选系统。

待测细胞荧光染色后制成单细胞悬液，在鞘液的包被下单行排列，依次通过流动室检测区域。以激光作为激发光源，垂直照射检测区域的样品流，被荧光染色的细胞在其照射下，产生散射光和激发荧光，它们同时被前向光电二极管和侧向90°方向的光电倍增管接收。前向小角度的光散射信号反映了细胞体积的大小；侧向90°方向的光散射信号反映了细胞内颗粒的复杂情况。

激发荧光信号代表了所标记的被测细胞内部颗粒的信息。这些光信号转化成电信号，被传送到计算机，经A/D转换器传输到微机处理器形成数据文件，保存到计算机上，以备脱机后的数据处理和分析。

细胞的分选是将待测液滴充以正负不同的电荷，让其在高压电场的作用下偏转，落入不同的收集容器中，从而实现细胞的分离。

特点

可归纳为“六高一低”

高精度

高速度

高灵敏度

高纯度

高效率

高科技含量

低分辨率

影响因素

可归纳为“三稳定一确保”

细胞荧光染色的实验条件要稳定（温度、PH、浓度、溶剂效应）；

正交光电测量系统要稳定；

鞘液流速系统要稳定；

要确保细胞悬液分布均匀，不得混油过量的杂质。

还在等什么，赶紧做笔记。。。

样品的制备（如下图，注意哦，根据实验目的提取相应的物质、选取相应的荧光染色剂）

注意事项

流式细胞技术的应用

流式细胞技术已被成功的应用于细胞大小和胞质内颗粒大小的测量、细胞周期分析、细胞存活力的测量，细胞内DNA、RNA和蛋白质含量的测定、膜电位和膜内pH值得测量、细胞内钙离子浓度的测量、体外细胞突变的跟踪和测量等方面。流式细胞仪(FCM)已在各学科中获得应用。

细胞生物学

定量分析细胞周期并分选不同细胞周期时相的细胞；分析生物大分子如DNA、RNA、抗原、癌基因表达产物等物质与细胞增殖周期的关系，进行染色体核型分析，并可纯化X或Y染色体。

肿瘤学

DNA倍体含量测定是鉴别良、恶性肿瘤的特异指标。近年来已应用DNA倍体测定技术，对白血病、淋巴瘤及肺癌、膀胱癌、前列腺癌等多种实体瘤细胞进行探测。用单克降抗体技术清除血液中的肿瘤细胞。

免疫学

研究细胞周期或DNA倍体与细胞表面受体及抗原表达的关系；进行免疫活性细胞的分型与纯化；分析淋巴细胞亚群与疾病的关系；免疫缺陷病如艾滋病的诊断；器官移植后的免疫学监测等。

血液学

血液细胞的分类、分型，造血细胞分化的研究，血细胞中各种酶的定量分析，如过氧化物酶、非特异性酯酶等；用NBT及DNA双染色法可研究白血病细胞分化成熟与细胞增殖周期变化的关系，检测母体血液中Rh(+)或抗D抗原阳性细胞，以了解胎儿是否可能因Rh血型不合而发生严重溶血；检测血液中循环免疫复合物可以诊断自身免疫性疾病，如红斑狼疮等。

药物学

检测药物在细胞中的分布，研究药的作用机制，亦可用于筛选新药，如化疗药物对肿瘤的凋亡机制，可通过测DNA凋亡峰，Bcl-2凋亡调节蛋白等。

流式细胞仪应用广泛，有荧光染色的物质基本可以通过流式细胞仪检测！