转发脑脊液检验技术要求

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脑脊液一般通过腰椎穿刺来采集一、标本采集、转运和贮存1.脑脊液标本采集宜使用无菌试管（用于细胞学检查的标本不宜使用玻璃材质的容器），若能采集足量标本，应将其分装至3～4支试管，每管宜取3mL～5mL，一般无需使用抗凝剂。2.第1管用于化学和免疫学检查（如蛋白质、葡萄糖等），第2管用于微生物学检查，第3管用于细胞计数和分类计数。如需要做其它检查（细胞病理学检查等），宜采集第4管标本。若第1管混有穿刺出血，不可用于以蛋白质检查作为主要依据的疾病诊断（如多发性硬化症）。3.脑脊液标本应在室温条件下尽快运送，细胞计数和分类计数宜在1h内完成检查，以免细胞破损。只有用于蛋白质和核酸分析的标本，可贮存于冷冻条件下（—20℃以下）。4.脑脊液微生物学检查标本不可冷藏，在室温条件下立即送检或在患者床旁接种。5.外观正常的标本无需稀释，浑浊和血性标本需进行1:10～1:倍稀释，稀释倍数甚至更高（需要时）。进行细胞计数时可使用等渗盐水稀释标本；进行有核细胞计数时，可使用3%冰醋酸对标本进行处理。二、手工法细胞计数方法a)将标本充分混匀，充液前可用旋转式搅拌器混匀（时间不能超过2min～5min）或手工颠倒混匀10～15次，避免过度震荡造成细胞破损，也不能产生气泡。b)分别吸取少量充分混匀的标本，充入计数板两侧的计数池（应确保计数板洁净），静置5min～10min（时间长短取决于细胞沉淀的效果）。c)使用低倍镜（10×）浏览细胞分布情况，细胞分布应均匀（每个大方格内细胞数量相差宜不超过10个），细胞应无重叠，否则宜重新充液。d)在高倍镜（40×）下选择合适的区域尽快进行细胞计数。每个计数池细胞计数区域的确定原则是：若初步估计9个大方格中细胞数少于个，则计数9个大方格（计数区域相当于9mm2）；若估计9个大方格中细胞数大于个，则计数4个角的大方格（计数区域相当于4mm2）；若估计1个大方格中细胞数大于个，则计数中央大方格内4个角和中央1个中方格（计数区域相当于0.2mm2）。计数压线细胞时，应遵循“数上不数下，数左不数右”的原则。2.4.1.4红细胞计数和有核细胞计数宜在同一计数池中完成，取两个计数池计数结果的均值进行报告。三、细胞形态学检查1.应在标本采集后4h内完成细胞涂片，若超过4h，结果报告时宜标注“细胞分类计数结果可能不可靠”。2.宜使用细胞离心涂片机（细胞甩片机）制备涂片进行细胞形态学检查，滴加标本前先向甩片机的标本室中加入1滴22%白蛋白溶液（无菌），可增强细胞对载玻片的粘附性。3.涂片制备后应置于室温条件自然晾干，宜进行改良瑞氏染色。4.进行细胞形态检查时，应能正确识别：成熟红细胞、有核红细胞；中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞；淋巴细胞、反应性淋巴细胞、浆细胞；单核细胞、巨噬细胞；脑室内衬细胞、柔脑膜细胞；恶性肿瘤细胞（原始细胞、淋巴瘤细胞、非造血系统肿瘤细胞等）；细菌、真菌和寄生虫等。5.应对有核细胞（包括各类造血细胞、内衬细胞、肿瘤细胞和非典型细胞）进行分类计数，计数结果以百分比报告。细胞类型无法确定时，可将其归入“非典型细胞”，并在报告中加以描述。6.怀疑恶性肿瘤时，应全片查找肿瘤细胞，发现疑似肿瘤细胞时应及时通知临床进一步做细胞病理学检查。四、病原学检查1.涂片检查对混浊或脓性脑脊液可直接涂片，染色镜检。对无色透明或无明显混浊的脑脊液，应使用细胞离心涂片机（细胞甩片机）离心。将脑脊液标本离心取沉淀物进行涂片，经革兰染色查找肺炎链球菌、葡萄球菌和链球菌等，亚甲蓝染色查找脑膜炎奈瑟菌，抗酸染色查找结核分枝杆菌，墨汁染色查找隐球菌。对于疑似寄生虫感染的患者，应注意查找吸虫卵、阿米巴滋养体和绦虫囊尾蚴等。2.病原体培养选择合适的培养基、培养条件进行普通细菌、苛养菌、结核分枝杆菌或真菌培养，临床怀疑脑脓肿时宜进行厌氧菌培养。所有进行培养的脑脊液宜同时进行病原菌的涂片检查。3.抗原检测可检测脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、隐球菌等病原菌抗原，检测结果宜与涂片检查和病原培养结果一起解释，脑脊液隐球菌抗原阳性有确诊意义；其他抗原阳性是重要诊断提示，宜结合病史、临床表现、脑脊液其他检查（细胞学、涂片和培养、化学等）综合判断。4.核酸检测必要时，实验室可采用PCR等分子生物学方法检测结核分枝杆菌、脑膜炎奈瑟菌等病原菌核酸。本文的内容来源于国家卫生行业标准，WS/T-《临床体液检验技术要求》